活体采卵B超采卵之前,先往收集管中注入smL磷酸缓冲液(PBs)和肝素液(5林g/mL),置于39℃恒温槽中。将长针与导管用含有肝素的PBS液冲洗两遍后准备采卵。母牛站立保定,用smL浓度为2%的里多卡因对牛进行硬膜外腔麻醉。操作人员对牛进行直肠检查,并掏净直肠内的粪便,清洗外阴部,将带有采卵针的探头插入到阴道深部,到达阴道育隆后根据所要穿刺的卵巢的位置把探头放到弯隆相应的一侧。操作人员一手拿探头一手通过直肠对卵巢进行牵引,把卵巢牵引到贴在探头上,使得我们能在显示屏上清楚的看到卵巢,根据活体采卵B超图像区分卵泡和CL,调整探头和卵巢的位置使监视器上卵泡位于穿刺针直线的延长线上时,推进穿刺针对卵泡进行穿刺。同时,用脚踏开关控制真空泵抽取卵泡液,真空泵的压力在60一80mm汞柱之间调整。从监视器上可以观察到被抽取卵泡液和卵泡开始缩小,变得不规则,黑色的影像变成了亮片,直到卵泡在图像上消失,退出穿刺针,再对第二个卵泡进行穿刺,抽取卵泡液,直到该侧卵巢上Zmm以上的卵泡被,穿刺完后,调整探头以相同的方法对另一侧卵巢的卵泡进行穿刺。最后,所有符合条件的卵泡都被穿刺完后,用含有肝素的PBS液冲洗采卵针及导管,冲洗液也方入收集管。将采得的卵泡液用胚胎收集虑杯过滤,卵母细胞留在滤杯中用PBs液反复冲洗几遍,将滤杯中卵母细胞倒入表面皿中,在显微镜下观察检卵,将检出的符合要求的卵母细胞放进成熟液中,在39℃和5%的二氧化碳饱和湿度的培养箱中进行成熟培养。

 

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